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　下颌骨髁突软骨细胞传代过程中生      

发表时间：2007-1-13 8:26:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     摘要　目的:观察体外培养及传代对人髁突软骨细胞生物学特性的影响。方法:采用体外细胞培养、免疫生化及分子生物学方法观察传代过程中人髁突软骨细胞形态、ⅱ型胶原及蛋白多糖合成及ⅰ、ⅱ、ⅲ型前胶原的mrna水平变化。结果:传代过程中人髁突软骨细胞ⅱ型胶原合成及其mrna水平逐渐降低，至第7代已基本丧失。而ⅰ、ⅲ型胶原的mrna水平随传代逐渐升高，同时伴有细胞蛋白多糖合成的减少，细胞壁形态由圆形或多角形转变为长梭形占优势。结论:体外培养及反复传代可影响软骨细胞的表型特征。髁突软骨细胞的反分化标准应从胶原、蛋白多糖合成及细胞形态等方面综合评价。　　软骨细胞的分化状态直接影响着软骨的生物学性能，软骨细胞分化异常是常见关节疾患——骨关节病的一个重要表现。研究体外环境中细胞分化状态的变化，可为寻找骨关节病有效防治手段及建立性状稳定的软骨细胞库奠定基础。以往研究［1］多为大关节软骨细胞。本研究采用形态学、生物化学及分子生物学方法对体外培养人髁突软骨细胞在传代过程中的生物学行为变化进行了观察。　　1　材料和方法　　1.1　材料和试剂　　ⅱ型胶原酶(sigma,usa),dmem培养基(gibco，usa),小牛血清(华西医科大学分子生物学实验室),ⅱ型胶原单克隆抗体(oncogene research products，usa)，含ⅰ、ⅱ型胶原cdna片段质粒(北京医科大学运动医学研究所曲绵域教授惠赠),含ⅲ型胶原及β-actin cdna片段的质粒(华西医科大学章锦才教授惠赠),细胞总rna分离纯化试剂盒及低熔点琼脂糖（gene co ltd，usa），限制性内切酶ecor i，hind ⅲ（gibco，usa），地高辛标记检测试剂盒及尼龙膜（boehringer mannheim，germany），其它试剂均为国产分析纯。　　1.2　髁突软骨细胞的分离、培养、传代　　参照文献［2］方法，下颌骨髁突软骨取自因健康原因需终止妊娠的4～6月水囊引产人胚胎，经机械分离及胰蛋白酶、胶原酶消化，获得高成活率、均一的软骨细胞。接种于含10％小牛血清的dmem培养基（青霉素100 u／ml，链霉素100 μg／ml，抗坏血酸50 μg／ml），于 co2孵箱内，37℃，5％co2饱和湿度下培养。待细胞长满汇合成单层后开始传代，本实验传代7次。　　1.3　髁突软骨细胞形态学观察　　在原代及传代培养过程中定期进行相差显微镜观察及摄影。　　1.4　生长曲线绘制　　将不同传代髁突软骨细胞按2×104／孔接种于24孔板。从接种后第1天起，随机取孔，以0.25％胰蛋白酶消化后记数，取均数描记生长曲线。共有2条文章 页次：1/2分页：9 1 2 8 :

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