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 转化生长因子—β可以诱导骺板软      

发表时间:2007-1-9 10:05:00

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       【摘要】目的:了解转化生长因子-β(tgf-β)诱导骺板软骨细胞增殖的作用。方法:采用鸡胚股骨无血清培养、pcna(细胞核增殖抗原)免疫染色方法研究对骺板软骨细胞增殖的作用。结果:pcna阳性软骨细胞数目与分布部位与tgf-β作用剂量、时间密切相关,pcna阳性细胞分布区域和数目远多于对照组,根据染色情况可以将pcna阳性细胞分为s期和非s期细胞二种。结论:tgf-β能诱导非增殖软骨细胞表达pcna,用pcna作为细胞增殖的指标是不适宜的。   转化生长因子-β(tgf-β)是骨组织重要的多功能生长因子,它在软骨内成骨过程中起着积极的作用[1]。以往研究发现该生长因子的生物学效应与细胞分化、细胞基质和血清是否存在密切相关[2],最近王凡等[3]用流式细胞仪研究骺软骨细胞周期的结果也表明tgf-β对软骨细胞增殖作用呈多样性。为提示tgf-β对骺板不同部位软骨细胞增殖的关系,我们用免疫组化方法观察pcna(细胞增殖核抗原)的表达,在原位上观察tgf-β对软骨细胞增殖的作用。 1.材料与方法   1.1材料  tgf-β由第四军医大学西京医院孙玉鹏博士提供[4]。单克隆抗增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,pcna)血清购自美国dakoco。  1.2方法  用终浓度为0.11ng/ml、0.33ng/ml、1.00ng/ml、3.00ng/ml的tgf-β分别对无血清网格器官培养的14天鸡胚股骨进行作用,并设空白对照组。收集24、48、96小时实验组及对照组的培养骨。随后标本进行特定方法固定和包埋,制成7μm厚的切片。pcna免疫细胞化学(abc法)染色。切片水化后,经微波(国产galanz微波炉750w)修复抗原5分钟与抗pcna抗体(1:80)4孵育过夜。abc复合物作用后经dab显色。同样设置阴性对照。将阳性反应分为三级,分别为(+)弱阳性、(++)阳性和(+++)强阳性。 2结果   各实验组的骺板增殖区、成熟区至肥大区均见大量pcna阳性细胞分布,染色强度不一。光镜下,按染色情况可将pcna阳性细胞分为s期和非s期二种情况[5],s期pcna阳性细胞核内充满棕褐色的染色颗粒,染色颗粒分布在细胞核间隙和核膜的周围,染色较深,呈强阳性(+++),24小时后各实验组的阳性细胞主要位于骺板增殖区,成熟区和肥大区仅见少量阳性细胞(图1)。tgf-β作用48小时后,s期pcna阳性细胞主要分布于骺板成熟区和肥大区,其中0.33ng/ml组数目最多,1.00ng/ml组数目最少(图2)。非s期pcna阳性细胞分布范围广而多,所有区域均有分布,染色颗粒浅而松散,可以同时或分别出现在细胞核和细胞质内(图3),非s期pcna慢性细胞的表达与tgf-β作用时间和剂量有关(附表),少数阳性细胞镜下无法确切区分s期和非s期阳性细胞。  对照组pcna阳性细胞均为s期阳性细胞,数目较少,散在分布于骺板增殖区、成熟区,未发现非s期pcna为阴性(图4)。(图1~4见封二彩图)   附表tgf-β对骺板软骨细胞非s期pcna表达的影响 groups 24h 48h 96h 0.00ng/ml - - - 0.11ng/ml +++ + + 0.33ng/ml + ++ ++ 1.00ng/ml ++ ++ ++ 3.00ng/ml + +++ ++ pcna表达-阴性,+弱阳性,++阳性,+++强阳性3讨论   pcna是细胞dna聚合酶δ的附蛋白,在s期参与dna的复制,目前认为它的表达是衡量细胞增殖的重要指标并被广泛应用[6,7]。本实验亦用pcna作为s期细胞的标志观察骺板软骨细胞的增殖情况,发现tgf-β可以促使pcna的表达,且存在着量效和时效关系,这是以往未见报道。mccormick等[8,9]认为处于正常周期中各期细胞均可不断表达pcna的mrna,非s期多数在翻译成蛋白质之前就被降解以维持细胞内mrna一定水平,但一些生长因子(如tgf-α和pdgf)和癌基因产物(如c-myc)可以调节pcnamrna的水平和蛋白质的表达,促进mrna迅速和最大限度地翻译成蛋白质[10,11]。tgf-β通过何种途径促使软骨细胞表达pcna目前尚不清楚,直接作用还是通过产生其它因子间接作用有待于进一步研究。作者的研究已表明tgf-β在影响软骨细胞增殖分化作用时可以诱导癌基因c-myc的表达。本新闻共2页,当前在第1页12 出处:中国口腔种植学杂志

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