相关口腔诊所

　口腔外科文章--兔骨骼肌卫星细胞      

发表时间：2007-1-9 9:40:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>      　　摘　要：目的：研究体外分离培养的兔骨骼肌卫星细胞(sc)的生物学特性。方法：采用细胞培养方法，对兔骨骼肌sc进行活细胞观察，并测定兔骨骼肌sc的细胞生长曲线、细胞分裂指数、细胞贴壁率。结果：①兔骨骼肌sc为梭形，呈长轴平行排列，具有明显的方向性；②体外培养的兔骨骼肌sc在10代以内生长稳定，超过10代以后肌sc的融合能力和形成肌管的能力也随之下降。结论：体外培养的兔骨骼肌sc在合适的传代比例和培养条件下在体外能够生存并保持其特性。从肌sc稳定的生物学特性看，可以将其作为研究肌肉受损后再生修复的细胞模型，用于检测和研究某些基因和生长因子对肌肉再生和功能恢复的影响。 　　肌卫星细胞(sc)是一种正常情况下位于成熟肌纤维表面的肌源性细胞。当肌纤维损伤或受到一定刺激后，即促使原来广泛分布的sc向受损区迁移并被激活，进行有丝分裂，随后sc之间相互融合或与受损肌纤维末端融合，融合后的细胞即开始合成收缩蛋白。通过这种方式恢复受损肌肉的连续性和收缩功能〔1〕。体外培养的兔骨骼肌sc与体内的sc相比，其生物学特性如何，发生了那些变化，将直接影响到利用sc进行进一步的研究，目前相关的研究报道很少。本实验的目的在于对体外分离培养的兔骨骼肌sc的生物学特性进行研究，并比较组织块法、改良酶消化法和密度梯度离心法3种方法获得的兔骨骼肌sc的活细胞形态和生长特性。 　　1　材料和方法 　　1.1　实验动物为两月龄新西兰白兔。 　　1.2　采用组织块法、改良酶消化法和密度梯度离心法〔2〕分离兔比目鱼肌的sc，进行培养。对三种方法所获sc利用倒置显微镜进行活细胞形态观察；采用mtt法测定sc的生长曲线；同时测定sc的分裂指数和细胞贴壁率。 　　2　结　果 　　2.1　原代或传代后的肌sc倒置显微镜下的观察 　　2.1.1　组织块法　兔骨骼肌sc原代培养后第3天，在组织块周围长出梭形细胞和星形细胞，细胞体积中等，散在分布，细胞间较少见紧密连接(图1)。第9～10天，培养瓶中细胞长满。从第7天开始，梭形细胞的排列开始出现方向性，它们的长轴平行排列，部分细胞之间开始出现融合，形成多核细胞，同时有肌管形成。星形细胞呈网状排列。传代后的细胞部分呈梭形，多呈方向性排列；部分呈星形。融合的梭形细胞数量明显增加(3～6个/20×10倍视野)。根据免疫组化染色鉴定的结果，可确定该细胞是肌sc，但随传代次数的增加，星形细胞数量迅速增加，其生长速度远远快于梭形细胞。这样，在一定的生长时间内，梭形细胞数量相对逐渐减少。 　　2.1.2　改良酶消化法　原代培养24 h后即开始有细胞贴壁，多为梭形细胞，经鉴定是肌sc，呈长轴平行排列，少数为星形细胞。第3天部分肌sc即开始出现融合，肌管结构形成现象多见。传代后观察同组织块法。 　　2.1.3　密度梯度离心法　将细胞悬液加入15 ml离心管中，其下方为11.5 ml 20% percoll，最底层为60% percoll 1.5 ml。然后进行离心。根据密度指示球可划分为7层。各层容积分别为1～4层各2.5 ml，5、6、7层分别为2.1、0.5、1.4 ml(图2)。取第6、7层细胞进行培养，在原代培养24 h后即开始有细胞贴壁，几乎全部是梭形细胞，呈长轴平行排列，星形细胞和圆形细胞(红细胞)极为少见。从第3天开始出现梭形细胞融合成多核细胞和肌管形成现象。传代后几乎全部为梭形细胞，梭形细胞融合成多核细胞以及肌管形成现象多见(图3)。 图1　组织块法获得的细胞，第3 天(20×) 图2　密度梯度离心法各层细胞分布 　 　　图3　密度梯度离心法获得的细胞，可见梭形细胞融合，肌管形成(20×，he染色)。 　　2.2　兔骨骼肌sc的生长曲线 　　从图4中可以看出，细胞在接种培养后第2天数量有所减少，属于生长适应期。第3 天细胞数量重新开始增加。第4～6天细胞增殖速度最快，到第7 天增殖速度逐渐减慢。本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：姚红祥

医患交流

无论你有什么口腔方面的问题，都可以在这里提问，我们的口腔专家将会在24小时内在医患交流栏目为你解答    口腔文章 医患交流 供求信息 供应信息 求购信息 合作信息 企业搜索 招聘信息 人才信息 *问题: 来自省分: 姓名:

相关查找

北京大学口腔医院84    关注口腔保健:80岁    心电监护仪用于口腔外    口腔粘膜病并非无药可    失牙老人的口腔保健和    南京严控口腔医疗质量    香港华夏基金口腔项目    老年人的龋齿与口腔保    查查口腔，优生优育    镶牙会增大患口腔扁平    口腔种植牙的好处    鼻咽癌放疗所致口腔粘    二十一世纪口腔医学的    夏季格外当心口腔易发    让口腔异味远离生活    维生素C防治口腔异味    口腔健康的三级预防    也让口腔做做操    口腔保健的几种方法    口腔溃疡的定义及分类    301医院口腔新诊楼    广东省口腔医院番禺开    一口牙干吗分三段洗（    沈阳军区461医院口    口腔修复机器人    我国第一家口腔医学美    老年人注意您的口腔健    性传播疾病在口腔中有    关于口腔溃疡    淋病、梅毒的口腔表征