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小鼠舌体接种u14后癌周淋巴管的组织学计量研究--中国口腔网
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发表时间:2007-1-9 9:40:00
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摘 要:目的:观察小鼠移植瘤周生长过程中瘤淋巴管的分布规律。方法:采用酶组化染色光镜观察与半自动体视学形态定量相结合的方法对正常小鼠舌体及u14移植瘤瘤周组织内淋巴管形态和密度进行了动态观察。结果:(1)、接种u14肿瘤细胞后的不同时期小鼠舌体,其瘤周组织内总体毛细淋巴管(包括闭锁及有腔淋巴管)密度与正常舌体组织相比无显著性差异(p>0.05)。(2)、随着肿瘤组织的生长,开放的毛细淋巴管数目也随之相应增加,15天后达到一定峰值后则趋于稳定,同期开始较多地发现肿瘤细胞侵入淋巴管腔并出现颈淋巴结转移。结论:在肿瘤生长过程中,癌周组织内毛细淋巴管数目没有增多;肿瘤间质压升高和瘤周组织水肿所至的开放毛细淋巴管增多是肿瘤细胞发生转移的重要因素之一。
转移是恶性肿瘤最基本,最重要的生物学特性之一。淋巴道转移是其中最常见的转移途径。目前观点认为,原发肿瘤组织内不含淋巴管,恶性肿瘤主要是通过肿瘤边缘正常组织内的毛细淋巴管而进入淋巴系统进而造成淋巴结转移[1],因此不难理解,肿瘤发生淋巴道转移可能与肿瘤周围淋巴管的形态结构和解剖分布有密切关系。
lubanch[2]等经研究发现,随着恶性黑色素瘤浸润程度的增加,瘤周毛细淋巴管的密度增加。近年来国内有学者指出,肿瘤周围组织内淋巴管密度高于所对应的正常组织,并且随着颊舌癌组织的浸润,癌周组织内淋巴管数目明显增多,因而认为这一病理性增生是造成恶性肿瘤易于从淋巴道转移的重要因素之一[3,4]。与此相反,fallowfield[5]等认为肿瘤周围淋巴管仅是正常组织内的残余淋巴管,并无直接证据证明肿瘤组织能导致淋巴管增生。因此有关恶性肿瘤能否引起组织内淋巴管增生还存在争议。本研究的目的在于利用动物实验的方法动态观察肿瘤周围组织内毛细淋巴管及淋巴管的数量随肿瘤生长的变化情况,为探索肿瘤周围淋巴管密度与肿瘤淋巴道转移的关系提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
昆明小鼠56只,体重25~30g,鼠龄8~10周,雌雄各半。
1.2 动物分组及处理
将全部小鼠随机分为7组,每组8只。
对照组:不加任何处理措施于第20天时处死。
1组:u14细胞稀释液0.05ml(内含瘤细数为5×105)作舌体中份肌肉内接种后1天处死。
2组:同量u14细胞舌体中份肌肉内接种后5天处死。
3组:同量u14细胞舌体中份肌肉内接种后10天处死。
4组:同量u14细胞舌体中份肌肉内接种后15天处死。
5组:同量u14细胞舌体中份肌肉内接种后20天处死。
6组:同量u14细胞舌体中份肌肉内接种后留待自然死亡。
1.3 标本处理
动物处死后切取舌体组织,编号记录后经恒冷切片机做连续切片直到切完整个标本厚度,然后从前向后进行等距随机抽样,每个标本抽取10张切片。作淋巴管的改良酶组化染色,即按wachstein法作5′-nase染色反应,经苏木素和伊红复染后封片。
1.4 组织学定量分析
将酶组化染色切片置于mias-2000显微图像半自动分析仪下进行测量。由计算机分别由自动计算出正常舌体组织肌层及瘤周舌体总体毛细淋巴管及淋巴管(包括闭锁及开放在内)、开放淋巴管的面数密度(面数密度=单位面积中毛细淋巴管及淋巴管数目)以及开放淋巴管的平均截面积和平均管径等参数值。
1.5 统计学处理
用spss统计软件包对图像分析系统所得参数值进行各组参数值之间的卡方检验。
2 结果
瘤组织经5′-nase染色显示:瘤周组织内管壁染成棕色,成明显管腔状的结构为开放淋巴管;肿瘤及粘膜下组织内染成棕色,呈条索状或线状的结构为开放淋巴管。见图1。图像分析系统对所得参数经卡方检验处理后的结果见表1~4。
图1 5′-nase染色显示瘤周淋巴管
表1 各组小鼠舌肌内瘤周总体淋巴管面数密度(个/mm本新闻共3页,当前在第1页123
责任编辑:姚红祥
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