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 4nqo饮水法诱发小鼠舌癌前病变模      

发表时间:2007-1-9 9:40:00

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       [摘要] 目的:建立与人口腔癌前病变相似的动物模型。方法:采用0.001% 4-硝基喹啉1-氧化物(4nqo)饮水法对balb/c近交系小鼠进行诱发实验。16周和20周时处死小鼠,观察病变情况。结果:舌背黏膜癌前病变的总发病率为100%。16周时以轻度和中度异常增生为主;20周时以中度和重度异常增生为主。结论:4nqo饮水法的致病过程和组织病理学特征与人相似;0.001% 4nqo饮用16~20周是舌癌前病变动物模型建立的理想时间。 应用动物模型研究口腔癌一直是口腔癌研究中应用最普遍、最有效的方法。迄今为止,以饮水方式诱发小鼠产生口腔癌前病变的研究在可见文献中未见报道。我们尝试用4-硝基喹啉1-氧化物(4-nitroquinoline 1-oxide ,4nqo)饮水法诱发小鼠产生舌黏膜癌前病变,成功地建立了动物模型。   1 材料与方法   1.1 材料 6周龄雄性清洁级balb/c近交系小鼠50只(中国科学院上海实验动物中心提供),体重(23±2) g。实验条件:室温17~25 ℃,湿度40%~60%,以标准固体饲料喂养,24 h自然光暗循环。药品为4nqo(美国sigma公司)。   1.2 实验方法   1.2.1实验分组 小鼠50只,随机分为2组:实验组40只,分别饮用4nqo 16周(20只)和20周(20只);对照组10只小鼠,自由饮用普通自来水16周(5只)和20周(5只)。   1.2.2 给药方式 4nqo用蒸馏水配置成0.01%浓度,置4 ℃冰箱避光保存。用时以普通自来水稀释成0.001%浓度置避光瓶内自由饮用。每周更换实验组和对照组饮水2次。   1.3 观察指标   1.3.1 饮水量及体重 实验全过程中,每周观察记录一次小鼠的饮水量及体重。   1.3.2 舌黏膜 在乙醚轻微麻醉状态下,每2周观察记录一次小鼠的舌黏膜变化。   1.3.3 大体及组织病理学观察 16周及20周时,乙醚麻醉小鼠,颈椎拉脱位处死,立即解剖,取全舌、颊、腭、食道、前胃、肝、肺等组织标本,观察并标记测量标本的大体损害,于10%中性福尔马林液中固定。24 h后,乙醇梯度脱水,常规石蜡包埋,4 mm切片。每个样本切取舌前、中、后各3张切片进行he染色,光镜下观察病理改变。病理诊断与分级参照who(1978)标准[1]。   1.4 统计学分析方法 所有数据均以均数±标准差(±s)表示,组间比较用卡方检验,p<0.05为检验标准。   2 结果   2.1 一般情况 实验全过程中小鼠无死亡,实验小鼠无明显毒副反应。各组间饮水量及体重无显著性差异(p>0.05)。   2.2 大体观察 16周和20周对照小鼠舌黏膜呈粉红色富有弹性,舌乳头分布均匀,舌体柔软,无白斑样改变,为正常小鼠舌黏膜外观。12周时个别实验小鼠(4/40)开始出现舌背后部黏膜白斑样变,范围小,约2~4 mm大小,14周时出现白斑样变小鼠增多(12/40),且改变逐渐明显,范围由后向前扩大。16周时半数实验小鼠(20/40)舌背后部黏膜呈片状白斑样改变,局部黏膜可出现1~2 mm大小白色斑点或斑块,呈1~2个灶性分布,略高出黏膜表面。20周时多数(35/40)实验小鼠舌背后部黏膜呈大面积白色斑片状改变,略高出黏膜表面,表面粗糙,可呈颗粒样外观,舌背人字沟附近的黏膜明显。实验小鼠舌背黏膜白斑样变均以舌背后部为重,其次为舌背中部,舌尖最轻。对照组及实验组小鼠舌黏膜均未见炎症和坏死。   2.3 组织病理学观察 对照组小鼠舌背黏膜上皮层次清楚,细胞排列正常,未发现上皮异常增生等变化,并随饮水时间的延长无明显变化。各组小鼠舌背黏膜病变诊断结果见表1。40只实验小鼠均出现了癌前病变,总发病率为100%(40/40),大体病变的程度与镜下异常增生的程度基本一致。对照组(16周和20周)舌背黏膜鳞状上皮层次清楚,钉突均匀,细胞形态正常,仅有2例(20%)黏膜上皮出现单纯性增生。16周时病变以轻度和中度异常增生为主(19/20),20周时以中度和重度异常增生为主(16/20)。16周时的轻度异常增生表现为棘层增厚,钉突伸长、变宽。20周时的中度异常增生表现为鳞状上皮明显增生,基底细胞层次增加,核浓染,棘层以上局部上皮可见明显增厚,见图1。20周时的重度异常增生表现为鳞状上皮显著增生,基底细胞呈多层样,核浓染增多,细胞及核异型性,滴状钉突相互融合,见图2。20周时舌背和舌尖的病变程度均较16周时舌背和舌尖的病变程度为重。病变周围均可见上皮的单纯性增生。本新闻共3页,当前在第1页123 责任编辑:姚红祥

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