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　口腔外科文章--磁导向甲氨蝶呤缓      

发表时间：2007-1-9 9:40:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>      　　摘　要：目的：探讨磁导向甲氨蝶呤缓释药物(fm-mtx)对舌癌细胞凋亡的诱导作用，了解新药fm-mtx治疗舌癌的作用机理。方法：选用不同剂量的fm-mtx与人舌鳞癌tca8113细胞系共同培养。按不同时间收集细胞悬液，并在透射电镜下观察细胞超微结构的变化。结果：细胞经fm-mtx药物处理组，1 h后，透射电镜下即可看到瘤细胞溶酶体大量增生，4 h后瘤细胞胞浆溶酶体开始吞噬磁性微粒，24 h吞噬颗粒明显增多，溶酶体膜开始裂解，颗粒释放到胞浆内。72 h后其内质网及线粒体内也可见颗粒沉积，溶酶体膜有消失现象，呈现胞浆空泡结构。96 h后部分瘤细胞出现凋亡。结论：甲氨蝶呤缓释药物(fm-mtx)对舌癌细胞凋亡起诱导作用，进入瘤细胞的细胞器，对肿瘤细胞有明显的杀伤作用。 　　细胞调亡(apoptpsis)是一种细胞生理性程序化死亡(programmed cell death)，是当前肿瘤研究较活跃的领域。抗癌药物诱导肿瘤细胞发生凋亡，将成为肿瘤治疗的新焦点〔2，6〕。本文通过电镜及流式细胞术，分析了抗癌药物磁导向甲氨蝶呤缓释药fm-mtx对舌癌细胞凋亡的诱导作用，了解新药fm-mtx治疗舌癌的作用机理。 　　1　材料与方法 　　1.1　细胞系及细胞培养 　　人舌鳞癌细胞系tca8113细胞由上海第二医科大学口腔医学院建株，第四军医大学口腔医学院口腔生物学教研室提供。将细胞接种于含体积分数为15%小牛血清的rpmi1640(gibco)培养液中、37 ℃ 的体积分数为5% co2条件下培养。 　　1.2　fm-mtx进入瘤细胞后内在化过程超微结构观察 　　取生长旺盛的tca8113细胞消化传代，加rpmi1640培养液，制成细胞悬液，细胞计数调至1×105个/ml。传至中号培养瓶6瓶，培养24 h后，取5瓶，每瓶加入fm-mtx 100 μg/l，继续培养，分别于1 h，4 h，24 h，72 h，96 h收获细胞，离心(1000r/min,5 min)，弃上清，用0.1 mol/l pbs(ph 7.4)洗3次，弃上清，向细胞沉定内加入体积分数φ为2.5%戊二醛溶液固定1周。10 g/l锇酸后固定2 h，系列乙醇脱水后入丙酮。epon812环氧树脂包埋。制备成超薄切片，铀-铅双染色，jem-2000ex透射电镜观察fm-mtx药物颗粒进入瘤细胞的内在化过程。 　　1.3　fm-mtx对细胞周期的影响 　　取对数生长的tca8113细胞，用2.5 g/l胰酶消化制成105个/ml的细胞悬液，传至中号培养瓶4瓶，继续培养24 h后，其中3瓶中分别加入fm-mtx 1000、100、10 μg/l，另一瓶不加药物作为对照组。在加热后第3 d收获细胞。各瓶细胞分别用2.5g/l胰酶消化5 min，使细胞尽可能分散成单个细胞。移入离心管中。离心(800r/min,5 min)，弃上清，加预冷4 ℃ pbs 10 ml(ph7.4)吹打均匀，待细胞分散良好时，将其吹入预冷4 ℃的φ(乙醇)=70%中固定48 h，在fcm上检测细胞周期变化。对各组细胞大小、dna含量、细胞周期g1、s、g2各期细胞数分布比例进行测定，用multicycle软件分析并打印细胞周期分布状况〔3〕。 　　2　结　果 　　2.1　fm-mtx对瘤细胞内在化过程 　　在生长旺盛的tca8113细胞中加入fm-mtx药物，1 h后，透射电镜下可见瘤细胞内溶酶体大量增生，溶酶体内尚未见到fm颗粒的沉积(图1)。4 h后可见溶酶体内有吞噬的fm超微磁粒；瘤细胞内线粒体肿胀，糖原颗粒增多(图2)。24 h则见溶酶体明显增大，fm颗粒增多(图3)。48 h溶酶体膜裂解，胞浆内可见磁微粒(图4)。72 h粗面内质网及线粒体内均可见有磁微粒沉积，溶酶体膜消失，胞浆呈空泡结构(图5)。96 h出现凋亡细胞，核固缩，可见凋亡小体(图6)。 图1　瘤细胞内溶酶体大量增生(tem×3k) 图2　溶酶体内有吞噬的fm超微磁粒，线粒体肿胀，糖原颗粒增多(tem×30k) 图3　溶酶体明显增大，吞噬的fm颗粒增多(tem×60k) 图4　溶酶体膜裂解，胞浆内可见磁微粒(tem×60k) 图5　溶酶体膜消失，胞浆呈空泡结构(tem×30k)本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：姚红祥

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