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肿瘤抑制基因nm23-h1在口腔鳞癌
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发表时间:2007-1-9 9:40:00
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【摘要】 目的 研究nm23-h1蛋白在口腔鳞癌中的表达情况,并探讨它与口腔鳞癌患者预后的关系。方法 采用免疫组化sabc法检测75例口腔鳞癌、19例癌旁粘膜、8例正常口腔粘膜及9例颈淋巴结转移灶中的nm23-h1蛋白染色,利用χ2检验及单因素、多因素cox比例风险模型进行统计分析。结果 χ2检验发现,nm23-h1蛋白表达水平在生存期小于3年组和大于7年组间差异有显著性(p<0.05)。单因素cox模型分析发现nm23-h1蛋白表达水平等因素与预后有关;多因素cox分析未发现nm23-h1蛋白表达水平等因素与预后有关。结论 nm23-h1蛋白表达水平的高低可能不是影响口腔鳞癌患者预后的主要因素,nm23-h1蛋白可能通过对转移的作用间接影响预后。
nm23基因是近年来较为引人注目的肿瘤转移抑制基因,许多研究表明,nm23基因与乳腺癌、肝癌、胃癌、前列腺癌等多种人类肿瘤的转移及预后相关。目前研究显示,nm23基因有nm23-h1、nm23-h2两种亚型,其中只有nm23-h1基因与肿瘤转移及预后有明显关系。有关nm23-h1基因在口腔鳞癌组织中的表达情况及其与预后关系的研究尚未见报道。我们通过免疫组化技术检测口腔鳞癌组织中nm23-h1基因的蛋白表达情况,并探讨了它与口腔鳞癌患者预后的关系。
材料与方法
1.主要试剂及来源:nm23-h1单克隆抗体(美国santacruz公司);sabc免疫组织化学试剂盒(boster公司);dab显色试剂盒(美国zymed公司)。
2.标本来源:口腔鳞状细胞癌75例,口腔鳞癌癌旁粘膜(取粘膜上皮组织学形态基本正常者)19例,颈淋巴结转移灶9例,正常口腔粘膜8例。均为北京协和医院及北京口腔医院颌面外科1985~1990年手术切除及活检标本,常规福尔马林固定、脱水、石蜡包埋,所有标本均经病理检查证实。制备4μm连续切片分别用于常规he染色和免疫组化染色。
3.临床及病理资料:75例口腔鳞癌中舌癌32例、牙龈癌25例、颊癌18例。均为手术治疗,部分病例辅以放疗及化疗。临床病理资料来自住院及门诊病案记录,临床分期依口腔颌面部恶性肿瘤的tnm分期及临床分期标准分为4期;肿瘤大小依tnm分期分为t1、t2、t3、及t44组;病理分级按who1971年的分级方案分为高、中及低分化鳞癌3级;颈淋巴结转移与否以术后病理检查结果为准。患者术后情况及生存期来自复诊及随访资料。64例有完整的复查及随访记录,11例失访。
4.nm23-h1蛋白的免疫组织化学染色:采用sabc法进行免疫组化染色,dab试剂盒显色,具体操作步骤按试剂盒说明书进行。一抗滴度为1∶50,4℃孵育过夜。
5.质量控制:每个染色流程均设有对照以作为染色质量控制标准,阳性对照采用已知的阳性组织切片,空白对照用pbs代替一抗,替代对照用正常血清替代一抗。
6.结果判断及评分方法:nm23-h1蛋白免疫组化染色的阳性信号为黄棕色反应物质,主要位于上皮及肿瘤细胞胞浆中。参照barnes等[1]和royds等[2]的方法结合着色程度和阳性着色范围进行评分。将着色程度分4级:基本未见着色、染色与背景相似为0级;着浅黄色、染色略高于背景为ⅰ级;中度着色、黄棕色、染色明显高于背景为ⅱ级;强染、着深棕色为ⅲ级。每张切片观察10个肿瘤细胞异形性较明显的10×40倍视野,至少计数100个肿瘤细胞(如为正常上皮则计数上皮细胞),分别记录0~ⅲ级染色细胞数。所有肿瘤细胞均为0级或偶见ⅰ级染色的细胞,为(-);ⅱ、ⅲ级染色细胞数之和与总细胞数之比小于25%者为(+),在25%~50%之间者为(++),在50%~75%之间者为(+++),大于75%者为(++++)。(-)、(+)、(++)为低染组,(+++)、(++++)为高染组。
7.统计分析:应用epi和sas软件分别进行χ2检验,并用单因素、多因素的cox比例风险模型分析染色及临床病理指标与患者生存期、预后的关系。
结果
1.正常及癌旁口腔粘膜中nm23-h本新闻共2页,当前在第1页12
责任编辑:姚红祥
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