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涎腺肿瘤c-erbb-2癌基因mrna表达
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发表时间:2007-1-9 9:40:00
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【摘要】 目的 探讨c-erbb-2mrna表达水平同涎腺肿瘤组织类型、发生和生物学性质的关系。方法 采用dotblot杂交,以32p标记的寡核苷酸探针,以正常涎腺为对照,对涎腺肿瘤c-erbb-2mrna表达进行研究。结果 正常涎腺和涎腺肿瘤中发现不同程度c-erbb-2mrna的表达,以正常涎腺组织的表达水平为基准,在腺淋巴瘤、基底细胞腺瘤呈现低表达、无表达或与正常涎腺组织表达水平相似,多形性腺瘤、粘液表皮样癌、腺泡细胞癌、腺样囊性癌、乳头状囊腺癌和肌上皮癌则呈现不同程度的过表达。结论 c-erbb-2表达水平同涎腺肿瘤的生物学性质有关。 c-erbb-2癌基因最初由shin从大鼠神经胶质瘤中分离,它定位于人类染色体17q21上,编码的蛋白质与表皮生长因子受体相似,具有酪氨酸激酶活性,广泛分布于皮肤、肌肉、骨、涎腺、乳腺、胃、肠、肺及卵巢等组织脏器。我们采用dotblot杂交以32p标记的寡核苷酸探针对涎腺良性、恶性肿瘤进行c-erbb-2mrna表达研究,以探讨c-erbb-2mrna的表达同涎腺肿瘤组织类型、发生和生物学性质的关系。
材料和方法
1.探针:为跨人类c-erbb-2癌基因外显子6、7的28个寡核苷酸,序列为5'-ccc aag tcc tca ttc tac ctg gat gacc-3',经t4多核苷酸激酶标记系统(promeg公司)以32p(atp)对其5'末端进行标记。
2.组织:表1。
表1 c-erbb-2癌基因mrna表达(例)
分组
例数
-
+
++
正常组织
腮腺
4
0
4
0
颌下腺
5
0
5
0
涎腺良性肿瘤
腺淋巴瘤
4
2
2
0
基底细胞腺瘤
3
3
0
0
多形性腺瘤
12
0
0
12
涎腺恶性肿瘤
粘液表皮样癌
9
2
0
7
乳头状囊腺癌
6
0
0
6
腺泡细胞癌
4
0
1
3
腺样囊性癌
4
0
0
4
肌上皮癌
2
0
0
2
3.rna的提取:常规尿素氯化锂法的基础上增加一步蛋白酶k消化1h的改良方法,定量以瑞典产rna/dnacalculator进行。
4.dotblot杂交:每种组织的rna样品15μg常规行变性处理,点样量为60.00、30.00、15.00、7.50、3.75及1.88μl。65℃条件下预杂交7h(预杂交液内含5xssc,5xdenhardt液,50mmol/l磷酸缓冲液,0.2%sds)。将32p标记的探针加入到上述预杂交液中,65℃杂交12h,常规漂洗。于-70℃曝光24h。在暗室中x线片显影,定影。
结果
1.正常组织:9例正常涎腺组织均阳性,各例正常涎腺组织阳性程度基本相似,以正常涎腺的阳性程度为标准,评价良、恶性肿瘤的表达水平(表1)。
2.良性肿瘤:腺淋巴瘤、基底细胞腺瘤的信号强度与正常涎腺相似,2例腺淋巴瘤表达水平比正常涎腺低甚至未见表达。与此相对,在所有的多形性腺瘤组织,其c-erbb-2mrna水平均呈现高表达。
3.恶性肿瘤:粘液表皮样癌中7例,腺泡细胞癌中3例及全部肌上皮癌、乳头状囊腺癌和所有腺样囊性癌的c-erbb-2mrna比正常涎腺的表达水平高,有的甚至比多形性腺瘤表达水平还高。
讨论
癌基因在正常细胞的发生和维持其功能中起重要作用,c-erbb-2癌基因功能的异常在肿瘤发生中起关键作用。实验证明,c-erbb-2癌基因可使转基因动物产生肿瘤。在人细胞中该基因活化方式主要有基因扩增、重排及其产物的过表达(包括转录水平和翻译水平的过表达,表现为细胞内蛋白的积聚),研究结果表明,该基因的激活可影响到肿瘤的发展进程和转归。
c-erbb-2做为与细胞增殖有关的癌基因,其mrna的表达与肿瘤的恶性度高、生长速度快、存活期短相关[1],与肿瘤分级、病理分型、淋巴结转移及生存率有关[2]。有报道它可能成为一个独立的预后判定指标[3],这在乳腺肿瘤的研究中已经得到证明。乳腺癌和卵巢癌的研究结果表明,c-erbb-2癌基因的扩增同肿瘤的预后有关。slamon等[4]发现约30%的患者存在c-erbb-2癌基因的扩增和表达。我们的研究结果证明,c-erbb-2癌基因mrna在涎腺多形性腺瘤、腺泡细胞癌、腺样囊性癌、乳头状囊腺癌中的表达明显高于正常涎腺,在多形性腺瘤中的过表达说明该肿瘤易复发、恶变。与此相比,腺淋巴瘤、基底细胞腺瘤却很少恶变。一些肿瘤c-erbb-2癌基因mrna表达水平低于正常涎腺,可能部分涎腺为肿瘤周围涎腺组织,在形态和分子水平上已发生某些改变,如发生导管上皮的增生,基因表达的累积不属于正常涎腺范围,通过原位杂交技术已经在部分涎腺发现导管上皮增生,并证明有过表达的c-erbb-2mrna信号存在。在恶性肿瘤中c-erbb-2mrna的表达水平比多形性腺瘤中的还高。c-erbb-2是参与涎腺恶性肿瘤发生的相关基因。正常情况下,c-erbb-2作为细胞信号传递中的调控因子,不仅参与细胞增殖而且影响到细胞的生长分化,正常涎腺c-erbb-2在外界各种致癌因素作用下可能处于量的积累状态,一旦癌变,c-erbb-2mrna表达便发生根本性变化。恶性肿瘤c-erbb-2癌基因在转录水平呈过度表达,相似于乳腺的研究结果,可能同二者在组织学结构、胚胎发生过程和病理学形态上相似有关。本新闻共2页,当前在第1页12
责任编辑:姚红祥
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