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　口腔粘膜鳞癌和癌前病变p53、ras      

发表时间：2007-1-9 9:40:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>      　　摘　要：目的　探讨p53、ras基因改变在口腔粘膜鳞癌及癌前病变发生过程中的意义。方法　应用聚合酶链反应和免疫组织化学法检测23例口腔粘膜鳞癌和15例癌前病变p53、ras基因突变和p53、p21蛋白的表达。结果　43.5%(10/23)的口腔粘膜鳞癌存在p53基因第8外显子突变，47.8%(11/23)ras基因有突变；口腔粘膜鳞癌p53、p21蛋白表达阳性率分别为43.5%(10/23)和60.9%(14/23)。癌前病变有1例存在p53基因第8外显子和ras基因突变(6.7%)；p53、p21蛋白表达阳性率分别为13.3%(2/15)和20%(3/15)。两组间差异显著(p＜0.05)。结论　p53、ras基因突变和p53、p21蛋白过量表达与口腔粘膜鳞癌的发生过程密切相关，可作为癌前病变发展为癌危险性的生物指标。 　　应用聚合酶链反应(pcr)和免疫组织化学法对口腔粘膜鳞癌和癌前病变p53、ras基因的突变及p53、p21蛋白的表达进行了研究，初步探讨了基因的改变在口腔粘膜鳞癌及癌前病变发生过程中的意义。 　　1　材料和方法 　　1.1　材料 　　随机选择在我院保存并经病理证实的口腔粘膜鳞癌23例(男14例，女9例，年龄36～78岁，平均57.7岁；临床ⅰ期7例，ⅱ期6例，ⅲ期7例，ⅳ期3例；其中颊癌10例，舌癌8例，牙龈癌3例，腭癌1例，唇癌1例)、癌前病变15例(男8例，女7例，年龄39～79岁，平均56.1岁；其中舌部6例，颊部5例，牙龈2例，腭部1例，唇部1例)的石腊标本。 　　1.2　p53、ras基因的pcr扩增 　　用病理切片刀将每例石蜡标本切取5μm厚蜡屑2～4片，置于1.5ml离心管中，切片时注意严格清洁切片刀，防止标本间dna污染。将蜡屑用二甲苯脱蜡，乙醇洗涤后，用干净玻璃棒捣碎，加200μl去离子蒸馏水制成混悬液。采用pcr试剂盒(上海复华生物医学工程有限公司)扩增p53基因7、8外显子和ras基因。以2μl混悬液做模板，加入pcr反应液及1μl dna多聚酶，离心数秒后置pcr循环仪扩增，p53基因循环参数；94°c 保温40s，94°c 30s，63°c 45s，72°c 30s，循环32周期，72°c 保温5min。ras基因循环参数：94°c 保温4min，94°c 60s，55°c 60s，72°c 90s，循环40周期，72°c 保温4min。然后取10μl扩增产物加2μl溴酚蓝走3%琼脂糖凝胶电泳紫外透射仪上观察结果。 　　1.3　免疫组织化学染色 　　将石蜡标本切成4μm厚组织片，采用p53单克隆抗体d0-7、p21单克隆抗体f132和s-p免疫组化试剂盒(福州迈新生物技术开发公司)。按下列程序操作：切片脱蜡水化，3%h2o2处理灭活内源性过氧化物酶，置柠檬酸盐缓冲液(0.01mol/l，ph=6.0)中微波加热至沸点(2×10min)；50μl非免疫性动物血清温育5min；加50μld0-7和f132，湿盒中4°c过夜；加50μl生物素标记兔抗鼠抗体温育10min；加50μl链亲和素——过氧化物酶溶液温育10min，dab溶液显色3～10min，苏木素浅染，梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，封片，光学显微镜观察阳性细胞。p53定位于胞核：不染色0分，浅棕色1分，棕黄色2分，褐色3分；p21定位于胞浆：不着色0分，黄色1分，深黄色2分，棕黄色3分。阳性细胞比例：不染色为0分，＜20%为1分，20%～50%为2分，≥50%为3分。以上二项相加0分为(-)，2分为(+)，3～4分为(++)，5～6分为(+++)。 　　1.4　统计学分析：所有资料均进行χ2检验。 　　2　结果 　　2.1　p53、ras基因pcr扩增结果的分析 　　23例口腔粘膜鳞癌组织中，有10例p53基因第8外显子在200bp位点上(43.5%)和11例ras基因120bp位点上(47.8%)有突变；其中10例p53基因和ras基因同时突变，1例只有ras基因突变。15例癌前病变组织中有1例p53基因第8外显子200bp位点上的ras基因120bp位点上同时有突变(6.7%)。两组间p53基因第8外显子和ras基因的突变均有显著性差异(χ2=4.326,p＜0.05和χ2=5.341,p＜0.05)。p53基因第7外显子检测两组均无突变。 　　2.2　免疫组织化学染色结果分析(见附表)本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：姚红祥

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