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　牙齿发育中神经生长因子及其受体      

发表时间：2007-1-6 12:27:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     摘要　目的：探讨神经生长因子在牙齿发育中的作用。方法：制备人牙齿发育各阶段标本，进行神经生长因子及其受体的免疫组化研究。结果：两者在牙齿发育中有各自的时空表达。结论：神经生长因子不仅参与牙齿神经支配的建立，而且调控细胞的增殖分化和牙胚的发育。 　　牙齿发育是多因素参与的上皮与间充质间有序的相互作用的复杂过程。越来越多的证据表明：神经生长因子（nerve growth factor, ngf）作为一种多功能生长因子，是牙齿发育多因素网络调节的重要组成部分。目前，此类研究取材多限于大、小鼠牙胚，本实验采用免疫组化的方法研究ngf及其低亲和力受体（low-affinity p75 nerve growth factor receptor，ngfr）在人牙齿各发育阶段中的表达，以进一步明确ngf在牙齿发育中的作用。　　1　材料和方法1.1　标本制备　　8例合法引产正常胎儿，头臀长（crown-rump length,crl）为15～40cm,相应胎龄4～8个月。截取上下颌骨，40g/l多聚甲醛固定24h，edta脱钙液脱钙4周，脱水透明。以上过程均在4℃下进行。石蜡包埋，作4μm连续切片。同时收集因正畸或阻生而拔除的年轻恒牙（根尖孔敞开呈喇叭状）和成熟恒牙（根尖孔形成）,按以上方法处理。1.2　免疫组化染色　　使用美国zymed公司sp试剂盒，按其步骤进行免疫组化染色。石蜡切片脱蜡至水，30ml/l 过氧化氢液室温孵育10min以消除内源性过氧化物酶活性，浸入柠檬酸盐缓冲液内进行微波抗原修复，100ml/l正常山羊血清室温孵育10min，倾去血清，滴加1 ：50稀释的ngf、ngfr抗体（santa cruz biotechnology，inc. 进口，武汉伯士德公司提供），4℃过夜。37℃复温1h，滴加1：100稀释的生物素标记二抗，37℃孵育30min，最后滴加1 ：100稀释的辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育30min。以上每一步骤后pbs缓冲液振洗3次，每次5min。滴加新鲜配制的dab-h2o2液显色，苏木素复染，脱水透明封片。1.3　结果判断　　ngf为胞浆内抗原，其阳性表达细胞胞浆内可见明显棕黄色颗粒。　　ngfr表达于细胞膜上，其阳性表达细胞胞膜呈棕黄色。　　2　结果　　蕾状期：ngf、ngfr在牙板和成釉器为弱阳性表达，在邻近间充质细胞为阴性表达(图 1、2)。 图1　ngf在蕾状期和硬组织形成期牙胚的表达　×40 图2　ngfr在蕾状期和硬组织形成期牙胚的表达 ×40 　　帽状期：ngf在成釉器上皮（即内、外釉上皮和星网层细胞）和牙囊呈阳性表达，牙乳头阴性；ngfr仅有内釉上皮和牙囊呈阳性表达，余均为阴性（图3）。 图3　ngfr在帽状期牙胚的表达　×100 　　钟状早期：内釉上皮、中间层细胞呈ngf阳性，牙乳头细胞和牙囊呈弱阳性，外釉上皮、星网层为阴性； ngfr表达模式同帽状期（图4、5）。 图4　ngf在钟状早期牙胚的表达　×40 图5　ngfr在钟状早期牙胚的表达　×100 　　钟状晚期（硬组织形成期）：成釉细胞呈ngf阳性，ngfr阴性，成牙本质细胞两者均为阳性，其它细胞呈阴性（图1、2）。　　无论年轻恒牙还是成熟恒牙，成牙本质细胞和牙髓成纤维细胞均不表达ngf和ngfr（图6）。 图6　ngf、ngfr在恒牙的表达　×100 3　讨论　　牙齿的发育包括发育的起始、细胞分化和形态形成三个阶段，此过程主要受上皮和外胚间充质细胞间有序的相互作用的调控。目前，有关此调控的分子机制尚未十分明确，但可以肯定的是许多生物分子参与具体调控过程，如生长因子、转录因子、细胞膜表面成分和细胞外基质等。　　ngf作为神经营养因子（neurotrophin factors，ntfs）家族最先发现的成员，对神经系统的生物学效应是促进外周感觉和交感神经元及中枢胆碱能神经元的存活并诱导神经元的分化和成熟及维持其生理功能［1］ 。ntfs家族受体分高亲和力和低亲和力两类，前者由酪氨酸激酶原癌基因家族编码的产物组成，其中trka与ngf特异性结合，而低亲和力受体gp75本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：姚红祥

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