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　维甲酸缺乏对体外鼠磨牙牙胚冠部      

发表时间：2007-1-6 12:27:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     摘要　　目的：探讨维甲酸对体外鼠磨牙牙胚冠部形态发生的影响。方法：采用rpmi 1640半固态培养基，根据成分不同，培养基分为三组：含枸橼醛的培养基、含枸橼醛和维甲酸的培养基以及空白对照。将16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚分别置于rpmi 1640无血清半固态培养基表面培养6d，每48h更换培养基1次。结果：在含枸橼醛的培养基和空白培养基，牙胚未形成正常的牙乳头尖，颈环上皮位置表浅；在含枸橼醛和维甲酸的培养基，牙胚形成正常的牙乳头尖，颈环上皮增殖明显。结论：维甲酸缺乏妨碍了牙胚冠部正常形态的发生。 　　维甲酸是维生素a在体内代谢的主要产物，是胚胎发育不可缺少的成分，与细胞增殖、分化以及组织形态发生有密切关系。牙齿发育异常是临床上常见的牙体疾病，与遗传、妊娠期间营养成分缺乏有关。本实验采用了小鼠磨牙牙胚体外培养模型，用枸橼醛阻断牙胚组织的内源性维甲酸合成，探讨维甲酸缺乏对牙胚冠部形态发生的影响。1　材料和方法　　本实验所用小鼠为湖北医学科学院提供的昆明小鼠。小鼠胎龄以交配后次日见到阴道栓的时间为0d。将胎龄为16d的昆明小鼠断颈处死，浸入750ml/l酒精中消毒15s。取胎鼠下颌骨，于解剖显微镜下分离下颌第一磨牙牙胚。所用培养基为rpmi?1640无血清半固态培养基，基本成分包括青霉素500u/l，链霉素50mg/l，维生素c 200mg/l，hepes 20mmol/l，5g/l琼脂。根据培养基中枸橼醛(sigma)和维甲酸(sigma；全反式)的成分不同，将培养基分为3组： 　　①单纯枸橼醛(1μmol/l)　　②枸橼醛(1μmol/l)＋维甲酸(5×10-7mol/l)　　③空白　　培养基制备：用乙醇将维甲酸稀释至5×10-4mol/l；用蒸馏水将枸橼醛稀释至1mmol/l。在相应培养液中分别加入适量的1mmol/l枸橼醛和5×10-4mol/l维甲酸，并预热至40℃左右，再与45℃的30g/l琼脂(sigma)混合均匀，使相应培养基中含1μmol/l枸橼醛和5×10-7mol/l维甲酸。向培养液中加入琼脂之前，单纯枸橼醛组和空白组均加入相应体积的乙醇，使三组培养基中乙醇含量相同。　　培养方法和标本制作：将分离的牙胚分别置于不同的培养基表面，于37℃、含50ml/l co2恒温恒湿培养箱中培养2d后，更换无枸橼醛的培养基，培养基中其它成分不变，每48h更换培养基1次，共培养6d。培养结束后分别将牙胚置于bourn's固定液中固定8h，pbs洗30min，再用含少量饱和碳酸锂溶液的700ml/l酒精洗涤，直至牙胚的黄颜色全部褪去。常规脱水，石蜡包埋。制5μm厚度连续切片，苏木素染色，显微镜观察。　　2　结果　　16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚处于帽状期晚期，成釉器分为三层：内釉上皮层、星网状层和外釉上皮层，颈环位置表浅，无明显的牙乳头尖形成(图1)。 　　图1　16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚培养开始前处于帽状期，内釉上皮与外釉上皮交汇形成颈环(l)　(e:成釉器；p:牙乳头) 　　培养6d后，在含有相同成分的培养基上，牙胚形态相似；在含有不同成分的培养基上，牙胚形态均有明显差异。与培养开始之前相比，牙胚在空白培养基上形成明显的牙乳头尖，但颈环上皮的位置与培养前相比无明显变化(图2)。在含枸橼醛的培养基上，培养6d后牙胚虽有牙乳头尖形成，但不如空白组牙胚的牙乳头尖显著；颈环上皮的位置和空白组相似，与培养前相比无明显变化(图3)。在含枸橼醛和维甲酸的培养基上，牙胚培养6d后不仅形成高耸的牙乳头尖，颈环上皮也明显增殖，牙胚由帽状期发育至钟状期(图4)。 　　　　 图2　培养6d后，在空白对照培养基上形成明显的牙乳头尖(↑所示)，但颈环上皮的位置与培养前比无明显变化　(e:成釉器)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 图3　培养6d后，在含枸橼醛的培养基上牙胚虽有牙乳头尖(↑所示)形成，但形态不明显；颈环上皮的位置与培养前相似(e：成釉器)　　　　　　　　　　　　　　　　本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：姚红祥

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