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　大鼠正常牙髓和炎症牙髓中bcl-2      

发表时间：2007-1-6 12:27:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     摘要　目的：建立大鼠实验性牙髓炎模型；原位观察大鼠正常牙髓和炎症牙髓中bcl-2和bax的表达情况，探讨两者在牙髓炎病理变化中的作用。方法：利用 sd大鼠的下颌第一磨牙采用内毒素化学诱导法建立牙髓炎模型，用免疫组织化学染色的方法研究bcl-2和bax的表达及其意义。结果: 正常牙髓中bcl-2在成牙本质细胞层表达阳性，牙髓中央区域弱阳性, bax在成牙本质细胞层表达强阳性，牙髓中央区域阳性。在牙髓中央的表达弱于牙髓外周，bcl-2的表达在相应部位弱于bax。在炎症牙髓中炎细胞浸润区bcl-2表达强阳性，纤维包饶区和充血反应区表达分别为阳性和弱阳性, bax在炎症牙髓中着色较均匀。结论：成牙本质细胞凋亡与bcl-2和bax的表达量有关，正常牙髓中存在细胞凋亡，这与该部位bax表达量较高有关；bcl-2和bax是牙髓炎时炎细胞凋亡的重要调控因素之一。ont size=3>　　　　bcl-2是b细胞淋巴瘤/白血病-2（b cell lymphoma/leukemia-2, bcl-2）基因的缩写形式，是最早在人类细胞中发现的凋亡调控癌基因。bax是在人前白细胞基因文库中发现的一种凋亡相关基因。研究表明，bcl-2的抗凋亡作用及bax的促凋亡作用是通过二聚体的形式来实现的，两者在组织细胞中的表达量与细胞凋亡的调控紧密相关［1，2］。正常牙髓和炎症牙髓中存在细胞调亡［3］，那么bcl-2和bax在其中有什么作用，本文就此作一报道。1　材料和方法1.1　动物模型的制备　　参照余擎报道［4］，选用lps法的模型。1.2　免疫组织化学染色　　参照德国宝灵曼公司sp免疫组化试剂盒的方法，脱蜡至水后行微波抗原修复，用30ml/l h2o2消除内源性过氧化物酶的活性，100ml/l正常山羊血清（多抗）封闭37℃20min，倾去血清，分别滴加1:50的bcl-2和bax多抗工作液，4℃过夜。次日复温1h，滴加1:100的生物素标记二抗37℃30min，再滴加1:100的辣根酶标记链霉卵白素37℃30min，最后dab显色15min，苏木精复染，脱水透明，中性树胶封片。（所用试剂均购自北京中山生物技术有限公司，各步骤间均用0.01mol/l的pbs振洗，阴性对照用pbs代替一抗。）2　结果　　正常牙髓中bcl-2和bax均有表达，两者均定位于细胞的胞浆，bcl-2在部分胞膜上也有表达，表现为棕黄色着色。bcl-2在成牙本质细胞层表达阳性，在牙髓中央区域弱阳性表达（图1）； bax在成牙本质细胞层表达强阳性，在牙髓中央区域呈阳性表达（图2）。从阳性染色的强度来看，两者在牙髓中央的表达弱于牙髓外周，尤其是成牙本质细胞层，而bcl-2的表达在相应部位又弱于bax。 图1　正常牙髓中bcl-2的表达　(10×10)　　　　　图2　正常牙髓成牙本质细胞bax表达阳性　(40×10) 　　通过lps化学诱导，各实验组呈现出较典型的牙髓炎症性组织病理学改变，从穿髓点以下依次出现坏死区、炎细胞浸润区、纤维包饶区和充血反应区。在炎症牙髓中我们观察到，炎细胞浸润区bcl-2表达强阳性，纤维包饶区和充血反应区表达分别为阳性和弱阳性（图3）；bax在炎症牙髓中的表达也是阳性，但着色较均匀（图4）。此外，我们还注意到在1d组、3d组、5d组、7d组中，bcl-2和bax在炎症区域的表达是逐渐减弱的。 图3　bcl-2在炎症牙髓中的表达　(10×10)　　　　图4　bax在炎症牙髓中的表达　(10×10)　 　　　　3　讨论　　bcl-2是一种凋亡抑制基因，其编码的蛋白能抑制细胞发生凋亡，延长细胞的存活时间。bcl-2蛋白抗凋亡作用的机制尚不明确，但至少与以下因素有关：①bcl-2蛋白羧基端19个氨基酸构成疏水的跨膜整合区或称信号锚定顺序（signal anchor sequence）是bcl-2发挥作用的结构基础。②bcl-2通常以同源二聚体或异源二聚体的形式发挥作用。bcl-2可与同家族的bax、bcl-x(s)、al基因、bad及非同家族的bag-1形成异源二聚体。③bcl-2的作用受其它基因的影响，如p53、c-myc等。bax的基本生物学功能是促进细胞凋亡，其促凋亡作用也是通过同源二聚体或异源二聚体来调节的，其促凋亡作用受bcl-2、bcl-x(l)和bad调节，均以二聚体形式发挥作用。bcl-2和bax的表达具有一定的组织特异性和细胞分化阶段特异性。bcl-2基因在哺乳动物胚胎组织中广泛表达，在人成熟组织中主要表达于长寿细胞和/或具有增殖活性的细胞，bax的表达则更为广泛本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：姚红祥

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