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　转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的表达和意义      

发表时间：2007-1-6 12:27:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     摘要目的：探讨转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达和对牙胚发育的影响。方法：建立小鼠牙胚发育模型，用免疫组织化学检测转化生长因子βⅰ型受体（tβr-ⅰ）、ⅱ型受体（tβr-ⅱ）、ⅲ型受体（tβr-ⅲ）在牙胚发育中的表达。结果：转化生长因子βⅰ型受体、ⅱ型受体在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状期以及硬组织形成期均有表达，且随着成釉细胞和成牙本质细胞的逐渐成熟，表达增加，其中ⅰ型受体比ⅱ型受体表达量多，ⅲ型受体仅在蕾状期的成釉器上皮和钟状期的内外釉上皮、牙囊有弱表达。结论：转化生长因子β受体在牙胚发育过程中的时空表达与成釉细胞、成牙本质细胞的分化密切相关。 g>　　转化生长因子-β超家族成员（tgf-βs）在牙胚发育过程中起诱导和调节作用，有研究表明tgf-βs参与牙胚发生过程中的细胞分化，它们是通过细胞膜受体发挥作用的。有关tgf-βs受体在牙胚发育过程中的作用研究较少,本实验的目的是探讨tgf-βs受体在牙胚发育过程中的时空表达和tgf-βs参与牙胚发育的作用机理。1　材料和方法1.1　标本来源　　选昆明种小鼠（第四军医大学动物中心），雌性10只，雄性5只，体、性成熟后以2：1雌雄同笼，同笼后第一天观察阴栓为第0天，选14d（蕾状期）、15d（帽状期）、18d（钟状早期）、生后1d（前期牙本质生成）4个时间点的胎鼠及新生小鼠头部，40g/l多聚甲醛4℃固定24h，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，制备5μm厚连续切片，研究下颌第一磨牙牙胚情况。1.2　免疫组化主要试剂 　　tβr-ⅰ、tβr-ⅱ、tβr-ⅲ均为多克隆抗体（工作液，博士德公司）。sp试剂盒（美国zymed公司)。dab试剂盒(中山公司)。 1.3　免疫组化染色　　采用sp法，切片脱蜡至水，3ml/l h2o2室温下10min以消除内源性过氧化物酶，1g/l胰蛋白酶消化，正常羊血清孵育30min，滴加一抗（工作液），4℃湿盒过夜，37℃复温1h，滴加生物素化二抗（1：100），37℃孵育30min，酶结合物（1：100）37℃孵育30min，dab显微镜下控制显色。上述各步之后均用0.01mol/l pbs振洗3次，每次5min。阳性对照用乳腺癌组织，阴性对照用pbs代替一抗，苏木精复染，常规脱水，二甲苯透明，封片。2　结果　　转化生长因子-β超家族成员的3种受体（tβrⅰ、ⅱ、ⅲ）的染色部位位于细胞膜和细胞浆。本组观察到在牙胚发育的蕾状期,tβr-ⅰ、tβr-ⅱ在整个成釉器上皮细胞呈阳性，周围的间充质细胞呈弱阳性（图1），tβr-ⅲ在成釉器上皮呈弱阳性（图2）。在帽状期tβr-ⅰ、tβr-ⅱ在内釉上皮为阳性，在星网状层和周围的间充质细胞为弱阳性或阴性（图3），tβr-ⅲ呈阴性。在钟状早期，成釉器，牙乳头细胞开始出现分化,但尚未分泌硬组织基质, 内釉上皮、牙乳头细胞尚未分化为成熟的成釉细胞和成牙本质细胞，tβr-ⅰ、tβr-ⅱ在前成釉细胞、外釉上皮细胞、中间层细胞、牙囊细胞、前成牙本质细胞为阳性，在星网状层和牙乳头细胞为阴性（图4），tβr-ⅲ在前成釉细胞、外釉上皮细胞和牙囊细胞为弱阳性，在星网状层和牙乳头细胞为阴性。硬组织形成期（生后1d），内釉上皮细胞和牙乳头细胞在牙齿的生长中心分化成熟，tβr-ⅰ、tβr-ⅱ在成釉细胞、内釉上皮细胞、外釉上皮细胞、中间层细胞以及正在分泌牙本质基质的成牙本质细胞、牙囊细胞呈强阳性，成釉器附近的牙乳头细胞阳性，在星网状层阴性（图5）。tβr-ⅲ在整个牙胚中均为阴性。其中tβr-ⅰ在各时间点的表达均比tβr-ⅱ强。 图1　蕾状期 tβr-ⅰ在整个成釉器上皮细胞呈阳性，周围的间充质细胞呈弱阳性　40×6.7　　　　　　　　　　　 图2　蕾状期 tβr-ⅲ在成釉器上皮呈弱阳性,周围的间充质细胞呈阴性　40×6.7　　　图3　帽状期 tβr-ⅰ在内釉上皮为阳性，星网状层和周围的间充质细胞为弱阳性　40×3.3　　　　　本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：姚红祥

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