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　胰岛素样生长因子-ⅰ和骨形态发      

发表时间：2007-1-6 12:27:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     摘要目的：重组人胰岛素样生长因子-i(rhigf-i)、重组人骨形态发生蛋白-2(rhbmp-2)分别或联合应用对人牙周膜(pdl)细胞增殖的影响。方法：采用组织块法体外培养人pdl细胞，mtt法测定pdl细胞在不同生长因子刺激下的增殖情况。结果：rhigf-i 、rhbmp-2都可促进人pdl细胞的增殖，这种促增殖作用呈一定的浓度依赖性， rhigf-i与rhbmp-2联合应用对人pdl细胞的增殖有协同作用，且与单独应用相比相差显著。结论：rhigf-i、rhbmp-2可望作为牙周再生的生物活性介质，rhigf-i与rhbmp-2联合应用对pdl细胞的促增殖作用更强。t size=3>　　　　多肽生长因子是一类天然存在的生物活性介质，在组织修复过程中调节一系列关键的细胞活动：如增殖、趋化、分化和通过结合于细胞表面受体而致基质的合成等［1］，这类分子几乎对于所有组织损伤的修复都有效，howard howell等［2］将重组人血小板衍化生长因子(recombinant human platelet-derived growth factor, rhpdgf)和重组人胰岛素样生长因子(recombinant human insulin-like growth factor-i，rhigf-i)联合应用治疗根分叉病变取得了良好的效果。本研究旨在探讨rhigf-i、rhbmp-2单独或联合应用对体外培养人牙周膜细胞增殖的作用，为进一步研究rhigf-i、rhbmp-2联合应用于牙周再生治疗进行初步的探讨。1　材料和方法1.1　材料　　dmem培养液（gibco usa）; 胎牛血清（fcs,浙江金华清湖犊牛利用研究所)；rhigf-i(boehringer mannhein, german); rhbmp-2(本校生化教研室蒲勤博士惠赠);四唑盐（mtt，sigma,usa); 二甲基亚砜(dmso,西安化学试剂厂)。1.2　方法 1.2.1　牙周膜细胞的培养［3］　　取因阻生或正畸拔除的牙周组织健康的牙齿，用无血清dmem培养液冲洗3遍后，刮取其根中1/3牙周膜，剪成1mm3大小组织块，均匀铺于25ml培养瓶底，翻转瓶底向上，加入4ml含150ml/l灭活fcs、100mg/l链霉素、106u/l青霉素的培养液，置37℃，50ml/l co2，950ml/l空气条件下孵育2h，待组织块贴牢瓶底后，轻轻翻转培养瓶，继续培养,每3天换液1次，直至细胞从组织块周围游出。传代，取第4～6代细胞进行实验。1.2.2　对牙周膜细胞增殖的影响　　将生长良好的第5代牙周膜细胞以浓度3×107/l接种于96孔板，每孔100μl,培养液为含150ml/l fcs的dmem培养液，培养24h后，弃孔内液体和未贴壁细胞，无血清培养液洗3遍，实验组以含20ml/l fcs的dmem稀释不同浓度的rhigf-i、rhbmp-2、rhigf-i+rhbmp-2的生长因子加入孔内，阴性对照只加入含20ml/l fcs的培养液，每组4孔，连续培养72h后，每孔加入20μl mtt，继续孵育4h，弃孔内液体，每孔加入150μl dmso，充分振荡10min，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪上，测490nm波长处的吸光度值(a值)［4］。2　结果　(表1，2) 表1　rhigf-i、rhbmp-2对人pdl细胞增殖的作用 分组 剂量(μg/l) a值 pi(增加百分率) 对照 0 0.51±0.07 0 rhigf-i 3.125 0.65±0.08* 27.5 　 6.25 0.82±0.07** 60.8 　 12.5 0.89±0.15** 74.5 　 25 0.93±0.24** 82.4 rhbmp-2 25 0.60±0.09 17.6 　 50 0.64±0.07* 25.5 　 100 0.70±0.13* 37.2 　 200 0.71±0.07* 39.2 　 400 0.70±0.17 37.2 　　与对照组相比：* p<0.05, ** p<0.01 表2　rhigf-i、rhbmp-2联合应用对人pdl细胞增殖的作用 　　　分　组 a值 pi rhigf-i(3.125μg/l) 0.65±0.08 27.5 rhbmp-2(50μg/l) 0.64±0.07 25.5 rhigf-i(3.125μg/l)+rhbmp-2(50μg/l) 0.92±0.18*△ 80.4 *与rhbmp-2相比p<0.05 , △ 与rhigf-ⅰp<0.05 　3　讨论　　牙周组织再生过程能否顺利进行，关键就在于牙周膜细胞的增殖及分化。igf分为igf-i和igf-ii，igf-i对多种细胞的生长和分化有促进作用。有实验表明igf-i对人pdl细胞的有丝分裂有作用［5］，本组也证明了rhigf-i对人pdl细胞有促增殖作用，在25μg/l时增加百分率可达82.4% ，促增殖效果呈一定的浓度依赖性。对于牙周组织再生治疗，关键在于刺激剩余牙周膜细胞的增殖，使其活性提高，本组表明igf-i就具有这种作用。　　bmp对人pdl细胞代谢方面的研究较少，有实验表明bmp-7（即osteogenic protein-1,op-1）在200μg/l时对人pdl细胞的有丝分裂无作用［6］。王勤涛等［7］用提取的牛bmp作用于人pdl细胞，表明对其有促增殖作用，本组用基因重组人bmp-2进行实验，结果显示rhbmp-2可促进人pdl细胞的增殖，但作用相对较弱，200μg/l时增加百分率仅39.2% 。　　牙周组织再生过程由于不仅有软组织的再生，更需要硬组织的恢复，而不同生长因子其生物学作用各异，有报告将pdgf与igf-i联合用于牙周再生治疗［8］，也有将igf-i与tgf-β联合应用作用于人pdl细胞的报告［9，10］。igf-i是一种用于牙周再生的较好的活性介质，而bmp是作用于骨再生的重要因子，由于两者生物学作用的差异，单独应用只能显示各自的生物学作用。本组将igf-i与bmp-2联合应用，显示其效果并非简单的各自促增殖作用的叠加，而是具有促增殖的协同作用，说明两者具有良好的生物相容性，可望作为牙周再生研究的生物活性介质，进一步探讨对人pdl细胞不同功能的影响。 责任编辑：姚红祥

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