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　牙骨质基质提取物促进牙周细胞在      

发表时间：2007-1-3 9:55:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     摘要　目的:明确附着在牙根表面的牙骨质基质提取物具有促进牙周膜细胞附着的功能。方法:采集健康的牙龈组织和牙周膜,体外培养牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞。从因正畸需拔除的健康牙体表面获得牙骨质基质提取物,分别观察不同作用时间、不同浓度的牙骨质基质提取物对牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞在牙体表面附着的影响。结果:牙龈成纤维细胞、牙周膜成纤维细胞均对牙骨质基质提取物有浓度和时间依赖性，最佳作用时间为2小时，最合适浓度为10 μg/ml。且牙骨质基质提取物促牙周膜成纤维细胞附着的作用高于对牙龈成纤维细胞的作用。结论:牙骨质基质提取物能够促进牙周膜细胞在牙根表面上的附着。 extract of cemental matrix enhance periodontal cells bind to the root surface sui wen, hong yonglong, xiao minzhen 　　college of stomatology, the fourth military medical university 　　abstract　objective: to investigate whether the extract of cemental matrix can enhance periodontal cells binding to the root surfaces.methods: healthy human gingiva and periodontal ligament were acquired from patients, then gingival fibroblasts and periodontal cells were cultured in vitro. on the other hand, extract of cemental matrix was separated and clarified from healthy teeth which were extracted because of orthodontic treatment. finally, the effects of cementum matrix with different concentration and different time on the attachment of gingival fibroblast and periodontal cells to root surface were observed.results: the extract of cemental matrix could enhance the initial attachment of human gingival fibroblasts (hgf) and human periodontal cells (hpc) to the surface of root, and such effects were strengthened with increasing density and time. the optimal concentration of extract of cell attachment 10μg/ml, and the attachment was also proportional to the incubation time, reaching near maximal levels at 2 hours, furthermore, the extract of cemental matrix was more effective in promotting the attachment of human periodontal cells than that of gingival fibroblasts.conclusion: the extract of cemental matrix can enhance the initial attachment of hgf and hpc on the root surface. 　　key words:　extract of cemental matrix　　human gingival fibroblast　　human periodontal cell 　　牙骨质基质内含有多种可促进牙周膜细胞附着和移行的活性蛋白（统称牙骨质基质提取物），已证实牙骨质基质提取物可以附着到牙根表面上［1］,那么就有必要明确那些附着在牙根表面的牙骨质基质提取物是否具有促进牙周膜细胞附着的功能，以便于牙骨质基质提取物用于牙周病的治疗。 　　1　材料和方法 　　1.1　主要试剂和仪器 　　dmem培养液（gibcd公司,美国），胰酶（gibcd公司,美国），胎牛血清（金华清湖犊牛生物制品厂,浙江），牛血清白蛋白（华美生物工程公司），3164型co2孵箱（forma公司，美国),ymt-z型倒置显微镜（olympus，日本），24孔培养板(coring公司,美国），yj-875型超净工作台（苏州净化设备厂）。 　　1.2　细胞培养 　　1.2.1　牙龈成纤维细胞的培养　采集健康的牙龈组织块，放入含庆大霉素的dmem细胞培养基中，然后将牙龈组织块放置在玻片上，用眼科剪剪成细碎小块，并将剪碎的组织块粘附于培养瓶瓶壁上，加含抗菌素的dmem培养液，37℃的co2孵箱内培养。当瓶壁细胞铺满时，用胰酶消化后传代，每3天换1次液，5至14代均可用于实验。 　　1.2.2　牙周膜成纤维细胞的培养　取因正畸而拔除的健康恒牙，置入含培养液的培养瓶中，在超净工作台中用培养液冲洗数遍，刮取牙根中部1/3牙周膜，在玻片上剪成小于l mm3大小的碎决，均匀铺于25 ml培养瓶底再加入dmem培养液，37℃下co2孵箱培养，隔日换液，瓶壁细胞铺满时胰酶消化传代，4代以后用于实验。 　　1.3　牙片的制备 　　从口腔颌面外科临床采集牙周未感染的正畸牙，切除牙冠，在牙根表面贴上大小约0.3 cm×0.3 cm的双面胶，顺双面胶的边缘切取牙片，将牙本质面磨平，用丙酮除去牙片牙骨质面上的胶，再将牙片放入含3 mg/ml胶原酶和0.25％胰酶的溶液中，置37℃约72小时，pbs缓冲液冲洗3遍，将牙片放入含1 mg/ml青霉素和500 μg/ml庆大霉素溶液中24小时，再将牙片放入含1 mg/ml青霉素和500 μg/ml庆大霉素的dmem中24小时后，即可使用。 　　1.4　牙骨质基质提取物的提取 　　将健康成人牙齿表面的牙骨质刮下，通过含蛋白酶抑制剂的醋酸和胍两步抽提浓缩、冻干后备用。 　　1.5　细胞附着实验 　　1.5.1　牙骨质基质提取物不同作用时间对两种细胞附着的影响　牙片放入24孔板后，每孔分别加入bsa、牙骨质基质提取物，co2孵箱内孵化1小时，分别接种牙龈成纤维细胞、牙周膜成纤维细胞，再孵化l、2、4小时。胰酶消化后计附着细胞的数量，换算成单位面积附着细胞的数量，每个实验点各测3次，取平均值。 　　1.5.2　牙骨质基质提取物不同浓度对两种细胞附着的影响　细胞附着的检测同somerman等的方法［2］。 　　2　结　　果 　　牙骨质基质提取物能够促进牙周膜细胞在牙根表面附着，牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞均对牙骨质基质提取物有浓度和时间依赖性，最佳作用时间为2小时（图1～4）。与未加牙骨质基质提取物组对照，5 μg/ml的牙骨质基质提取物即能明显提高牙周膜成纤维细胞在牙根表面的附着，而对于牙龈成纤维细胞，则需10 μg/ml牙骨质基质提取物方可显著增强细胞在牙根表面的附着，从统计图上分析牙骨质基质提取物浓度10 μg/ml对牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞较为合适，而且牙骨质基质提取物促进牙周膜成纤维细胞附着的作用高于对牙龈成纤维细胞的作用。 图1　牙骨质基质提取物不同时间对牙龈成纤维细胞附着的影响 　　*　牙片牙骨质基质提取物处理组(下同) 　　▲　牙骨质基质提取物空白组(下同) 图2　牙骨质基质提取物不同时间对牙周膜成纤维细胞附着的影响本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：韩晓炜

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