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　牙周韧带细胞与骨髓基质细胞表面      

发表时间：2007-1-3 9:55:00

更多保健方面的文章请到中国保健网>>     关键词：人牙周韧带细胞 　　［摘要］ 目的：比较骨髓基质细胞与正常人牙周韧带细胞表面抗原的表达情况，探讨牙周韧带细胞与骨髓基质细胞的关系。方法：体外培养人牙周韧带细胞及骨髓基质细胞，采用免疫组化sp法检测细胞中cd14、cd44、cd105、cd34的表达，并进行图像分析。结果：与骨髓基质细胞相似，人的牙周韧带细胞上表达cd44、cd105，不表达cd34、cd14。结论：人的牙周韧带细胞与骨髓基质细胞在表面抗原特性上有相似性。　　　　［关键词］ 人牙周韧带细胞 骨髓基质细胞 cd14 cd34 cd44 cd105 牙周韧带细胞是牙周组织中的主要细胞，它对维持牙周组织稳态及修复再生牙周韧带有重要作用。人们一直认为牙周韧带中有前体细胞存在，这些细胞可以再生修复牙周韧带，这与近年来提出的成体干细胞的概念吻合；2004年，seo等证实了牙周韧带细胞中有成体干细胞。但与其它干细胞一样，牙周成体干细胞的来源问题一直无明确结论。早在1987年，mcculloch提出牙周韧带中的前体细胞可能源自骨髓基质，这些前体细胞来自骨髓，通过血管通道进入牙周韧带，定位于牙周韧带血管周围及骨膜间隙中。本研究通过比较骨髓基质细胞与正常人牙周韧带细胞表面抗原的表达情况，来探讨牙周韧带细胞与骨髓基质细胞的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 高糖dmem培养基（gibco, usa）,胎牛血清（gibco, usa）,青、链霉素（武汉华北制药厂）；小鼠抗人cd14、cd34、cd44、cd105单克隆抗体，sp-9000免疫组化染色试剂盒，浓缩型dab试剂盒（北京中山试剂公司）；hpias-1000高清晰度彩色病理图像分析系统。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 牙周韧带来源于因正畸或阻生拔除的健康牙，无菌条件下，刮取牙周韧带，常规组织块法进行原代培养。培养液为20％胎牛血清，100 μg/ml青、链霉素的高糖dmem培养基，细胞游出前，每5 d换一次液，细胞游出后每3 d换一次液。当细胞生长至90％汇合时，0.25％胰酶消化传代。取3代用于实验。骨髓取自健康成人，注射器肝素化后，抽取骨髓置入预先装有dmem培养基的无菌离心管中，100目钢网过滤，离心去上层脂肪，采用全骨髓培养法，以1×106个/cm2的密度置于25 ml培养瓶中，培养液为20％胎牛血清，100 μg/ml青、链霉素的高糖dmem培养基，7 d后首次换液，去除未贴壁的细胞，以后每3 d换一次液。当细胞生长至90%汇合时，0.25%胰酶消化传代，取第3代用于实验。 　　1.2.2 细胞爬片 将牙周韧带细胞消化后，以1×105 个/ml的密度传代至有1 mm×2 mm小盖玻片的培养瓶中，常规培养5 d后，取出小玻片，pbs洗3次，4%多聚甲醛固定15 min，pbs洗3次，细胞面向上粘于载玻片上，自然晾干后，-20 ℃保存备用。 　　1.2.3 牙周韧带细胞的鉴定 采用免疫组化法进行波形蛋白、角蛋白染色，改良gomori钙-钴法进行碱性磷酸酶染色 　　1.2.4 细胞免疫组化 取出备用的细胞爬片，室温下在pbs中复温；3％h2o2 阻断30 min，双蒸水洗2次，pbs洗1次，每次5 min；羊血清封闭30 min，pbs洗3次，每次5 min；甩去，分别滴加一抗（cd14、cd34、cd44、cd105），pbs及小鼠血清作为阴性对照，4 ℃孵育过夜，pbs洗3次，每次5 min；生物素化二抗 37 ℃孵育15 min，pbs洗3次，每次5 min；s-a/hrp 37 ℃孵育15 min，pbs洗3次，每次5 min；dab显色，苏木素复染，脱水，封片。 　　1.2.5 图像分析 采用hpias-1000高清晰度彩色病理图像分析系统，随机选取5个视野，进行吸光度分析，结果用spss11.5进行统计学分析，用单因素方差分析组间差别,snk法进行多重比较，p＜0.05有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 牙周韧带细胞的鉴定 波形蛋白为阳性，证实培养的细胞为中胚层来源的间充质细胞；碱性磷酸酶染色为阳性，与牙周韧带细胞的成骨特性相符，见 本新闻共2页,当前在第1页12 责任编辑：唐建华

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